FRET peptide teknoloji

Fluoresans sonans enèji transfè (FRET)

Fluoresans sonans enèji transfè (FRET) se yon pwosesis transfè enèji ki pa radyativ kote enèji eta a eksite donatè transfere nan eta a eksite akseptè atravè entèraksyon koup elektrik intermolecular.Pwosesis sa a pa enplike foton e se pou sa ki pa radyativ.Egzamen sa a gen avantaj ki genyen nan rapid, sansib ak senp.

Lank yo itilize nan tès FRET la ka idantik.Men, nan pifò aplikasyon yo, yo aktyèlman itilize diferan koloran.An brèf, transfè enèji sonorite lumineux se transfè yon pè dipol soti nan donatè a (koloran 1) nan akseptè a (koloran 2) lè gwoup donatè a eksite.An jeneral, spectre emisyon gwoup fluorophore Donatè a sipèpoze ak spectre absòpsyon gwoup Acceptor la."Lè distans ki genyen ant de fluorofò yo apwopriye (10 - 100 A), yo ka obsève transfè enèji fluorofò ki soti nan donatè a akseptè a."Metòd transfè enèji depann de estrikti chimik reseptè a:

1. Konvèti nan vibrasyon molekilè, se sa ki, limyè a lumineux nan transfè enèji disparèt.(Reseptè a se yon limyè quencher)

2. Emisyon an pi entans pase reseptè a li menm, sa ki lakòz yon chanjman wouj nan spectre fluoresans segondè a.(Reseptè yo se emeteur lumineux).

Gwoup donatè a (EDANS) ak jèn akseptè (DABCYL) yo lye inifòm ak substra natirèl la nan proteaz VIH, epi lè substra a pa dekonekte, DABCYL ka pase EDANS ak Lè sa a, vin endeslabl nan fliyò.Lè VIH-1 proteaz dekoneksyon, EDANS pa etenn ankò pa DABCYL, epi lisiferaz EDANS ka imedyatman detekte.Disponibilite inhibiteurs proteaz yo ka kontwole pa chanjman nan entansite fliyoresans EDANS.

FRET peptides se zouti pratik pou etidye nonspecificity peptidase.Depi pwosesis reyaksyon li yo ka kontinyèlman kontwole, li bay yon metòd pratik pou detekte aktivite anzim.Ekla ki pwodui apre idroliz lyezon peptide pa donatè / aseptè a bay yon mezi aktivite anzim nan konsantrasyon nanomolar.Lè peptide FRET la entak, li montre yon disparisyon toudenkou nan flash entèn la, men lè nenpòt kosyon peptide opoze donatè a / aseptè kase, li degaje yon flash, ki ka detekte kontinyèlman ak aktivite anzim yo ka Lè sa a, dwe kantite.